大鼠海马神经干细胞源性外泌体的提取与鉴定

作者：陈珊; 朱俊德^*; 赵雪; 龙婷婷; 周璐

来源：神经解剖学杂志, 2022, 38(06): 657-663.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2022.06.008

• 神经干细胞
• 外泌体
• 细胞分化
• 提取及鉴定
• 大鼠

目的:探讨SD胎鼠海马神经干细胞(NSCs)源性外泌体(Exos)的提取、鉴定。方法:选取15 d胎鼠海马组织提取NSCs,首先光镜下观察细胞生长的形态变化，免疫荧光组织化学染色法检测巢蛋白(nestin)的表达；然后诱导分化培养基继续培养，行神经元特异性微管蛋白(β-tubulin-III)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光组织化学染色鉴定NSCs,最后收集细胞培养上清液，按照梯度离心方法提取、纯化Exos,电子显微镜下观察其形态特点，纳米颗粒分析检测其粒径大小，Western Blot检测其特异性标志物CD9、CD63、肿瘤易感基因101(TSG101)的表达。结果:成功分离、培养了SD胎鼠海马来源的NSCs,光镜下细胞呈典型神经球状生长，nestin表达阳性。NSCs经过诱导培养后成功分化为神经元和星形胶质细胞，β-tubulin-III与GFAP呈阳性表达。电子显微镜下Exos呈现双层膜的杯口状结构，平均粒径(171.8±67.6) nm, CD9、CD63与TSG101蛋白呈阳性表达。结论:分离并培养了15 d胎鼠海马来源的NSCs,成功提取NSCs来源的Exos。

• 单位
  解剖学教研室; 基础医学院; 贵州医科大学