干扰ALAS2表达通过下调K562细胞线粒体自噬受体BNIP3L影响红系分化

作者：胡舒婷; 李欣瑜; 陈晗; 许吕宏; 方建培^*

来源：中国实验血液学杂志, 2020, 28(05): 1710-1717.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2020.05.047

• 亚铁血红素合成酶ALAS2
• BNIP3L
• 红系分化
• 活性氧
• 转录因子
• K562细胞

目的:探讨下调亚铁血红素合成酶(ALAS2)对线粒体自噬受体BNIP3L的作用及对K562细胞红系分化的影响。方法:通过慢病毒转染干扰ALAS2的表达,实时荧光定量PCR鉴定转染效率。采用流式细胞术检测K562细胞凋亡、细胞分化、线粒体膜电位、活性氧(ROS)水平,氯化血红素诱导K562细胞红系分化;蛋白免疫印迹法检测BNIP3L的表达。免疫共沉淀检测ALAS2与BNIP3L蛋白的相互作用。结果:与病毒空载对照组比较,ALAS2干扰组的BNIP3L mRNA和蛋白表达下降(P <0.01),转录因子GATA1、Nrf2表达下调,活性氧水平降低(P <0.05)。病毒空载对照组线粒体膜电位低于ALAS2干扰组(P <0.05),2组的细胞凋亡率无明显差异。氯化血红素诱导细胞分化96 h,ALAS2干扰组BNIP3L表达增加且高于病毒空载对照组,病毒空载对照组和ALAS2干扰组的CD71high CD235ahigh+CD71lowCD235ahigh细胞比例分别为53.5%和92.9%。ALAS2与BNIP3L蛋白无直接相互作用。结论:细胞内亚铁血红素水平影响BNIP3L表达,这可能与活性氧及转录因子的调节有关。BNIP3L低表达能减少细胞凋亡,而高表达则有利于红系分化。

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院