布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a抗原的克隆表达及其抗原性鉴定

作者：阿斯马热·马合木提; 郭刚; 包建玲; 刘文英; 李军; 张文宝^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(06): 638-641.

DOI：10.13350/j.cjpb.200604

• 布鲁氏菌
• Omp2a
• 抗原性
• 布鲁氏菌病诊断

目的构建和原核表达布鲁氏菌膜蛋白Omp2a,并进行抗原性鉴定。方法将布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a基因连接到pET-30α原核表达载体上,转化到大肠埃希菌菌株BL21内。重组蛋白rOmp2a经IPTG诱导,亲和层析纯化后用SDS-PAGE凝胶电泳分离,确定目的蛋白的大小和表达丰度。通过Western blot与患者血清反应,确定重组rOmp2a的抗原性及诊断价值。结果成功构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表达系统,测序表明阅读框架正确。用IPTG可诱导高表达Omp2a,SDS-PAGE显示其分子质量单位为38.4 ku,且其表达蛋白以包含体形式存在。Western blot显示rOmp2a能被布鲁氏菌感染患者血清识别,而不与细粒棘球绦虫和单纯疱疹病毒感染者血清反应。结论大肠埃希菌原核表达系统可高效表达不可溶的rOmp2a蛋白,该蛋白具有反应原性,对布鲁氏菌感染患者具有潜在的诊断价值。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 新疆医科大学; 基础医学院