摘要

建立人体脸部角质层中神经酰胺的提取及含量测定方法。本研究采用透明聚酯胶带对脸部皮肤角质层进行采样,采样面积为4.5cm2;在角质层神经酰胺的提取上,选择甲醇作为溶解剂,角质细胞采用超声波细胞破碎仪进行破碎,使神经酰胺充分释放,确定提取时间为20min。本研究采用了高效液相色谱(HPLC)测定脸部皮肤角质层神经酰胺,色谱条件为ZORBAX系列SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇/异丙醇(70/30),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为205 nm,进样量10μL。结果标准品神经酰胺mix浓度在5~200 mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数R2为0.99968(n=5),检出限为2.5 mg/L。该法对皮肤角质层神经酰胺测定的加标回收率为100.99%,相对标准偏差(RSD)分别为1.55%。此法可快速高效的对脸部皮肤角质层神经酰胺定量分析,得出测试者神经酰胺的含量为3.601μg/cm2。结论本文将神经酰胺的高效液相色谱检测方法,应用到人体脸部皮肤角质层神经酰胺的检测中。从皮肤角质层的采样、角质层神经酰胺的提取及高效液相色谱检测的条件上等作出了优化,从而达到取更少的样本量亦能简便高效的检测。为皮肤无创检测特定物质提供了科学方法。