检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

作者：郭紫晶; 何琪富; 汤承; 张斌; 岳华^*

来源：畜牧兽医学报, 2019, 50(04): 893-900.

• nebovirus
• 实时荧光定量RT-PCR
• 犊牛腹泻
• 检测

纽布病毒(nebovirus, NeV)是国内新发的犊牛腹泻病原,本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法。根据国内NeV流行株的聚合酶基因(RdRp)序列设计引物,通过反应条件和体系优化,成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法。结果显示:该方法在2.9×101～2.9×109copies·μL-1之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2=0.999 4,扩增效率为98%;该方法只特异性检出NeV,不检出常见无关病原;最低检测下限为29 copies·μL-1;批内和批间的变异系数分别为0.89%～1.89%和0.83%～1.15%;该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法(P<0.05)。对2018年8—11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41%,场阳性率为100%(15/15)。所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高,为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段。

• 单位
  西南民族大学