去甲基化诱导肿瘤特异性CD8+T细胞识别杀伤骨肉瘤

作者：李冰皓; 林鹏; 王战; 孙凌凌; 李恒元; 叶招明

来源：中华骨科杂志, 2017, 37(06): 329-339.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2017.06.002

• 骨肉瘤
• 细胞系,肿瘤
• 动物实验

目的探索肿瘤特异性免疫细胞杀伤骨肉瘤的实现方法,并分析使用过继性细胞输注免疫治疗对骨肉瘤产生的治疗效果。方法使用地西他滨(Decitabine,DAC)作为去甲基化药物对HOS及U2OS骨肉瘤细胞系进行治疗,采用PCR及Western Blot检测治疗后肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)的表达情况。在动物实验中,使用转染了萤火虫荧光素酶和HLA-A0201的人源肿瘤细胞系HOS在免疫缺陷NOD-SCID小鼠上成瘤,并使用DiR染色标记体外培养扩增的CTA特异性对应HLA人源CD8+T细胞输注,通过小动物活体成像系统检测T细胞在小鼠体内的分布,同时监测治疗过程中小鼠瘤块的生长情况。使用鼠源骨肉瘤细胞系K7M2在免疫健全鼠BALB/c成瘤,进行去甲基化,使用流式细胞仪分析治疗前后肿瘤块内淋巴细胞的比例、数量以及CD8+T细胞的活化情况,判断去甲基化对自体淋巴细胞浸润、活化的作用。结果使用DAC对骨肉瘤细胞系HOS及U2OS进行去甲基化后,所有被检测的CTA表达均不同程度的提高。在体外培养的骨肉瘤细胞经过至少5 d的DAC治疗后能被CTA特异性CD8+T细胞显著杀伤,DAC本身对骨肉瘤细胞系生长可产生抑制作用。在免疫缺陷动物模型中,经过DAC去甲基化预治疗的荷瘤小鼠能观测到明显的CTA特异性T细胞向肿瘤组织归巢现象,同时,去甲基化预治疗联合CTA特异性T细胞输注治疗显著抑制了骨肉瘤移植瘤的生长。在免疫健全鼠肿瘤模型中,去甲基化能促进自体T细胞向肿瘤组织的归巢,并提高肿瘤内CD8+T细胞的活性及其分泌的干扰素γ、颗粒酶B、穿孔素水平。结论去甲基化能在抑制骨肉瘤细胞生长的同时,提高骨肉瘤细胞的CTA表达,为以CTA为靶点的特异性细胞免疫输注治疗提供条件。

• 单位
  浙江大学医学院附属第二医院