慢病毒转染脐血CD34~+造血干细胞方法的优化

作者：周睿卿; 龚玉萍; 林娟; 何茜; 万永凤

来源：四川大学学报（医学版）, 2013, 44(01): 130-134.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2013.01.005

• 慢病毒载体
• CD34+造血干细胞
• 基因转染

目的探讨慢病毒载体系统转染人脐血CD34+造血干细胞优化的转染方法。方法采用第二代、第三代慢病毒载体系统,通过改变病毒浓度、感染体积、感染复数(MOI)值、感染方式、感染时间和感染后培养基等各方面条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pTRIPdU3-RNAiTALh-EF1a-GFP转染CD34+干细胞,于37℃、5%CO2的孵箱中培养14d后,在光学显微镜下进行集落计数和分类,并与未转染的CD34+干细胞进行比较,从而筛选出优化的转染方法。结果三质粒系统的第二代慢病毒载体转染率高于四质粒系统的第三代慢病毒载体。优化的转染条件为:新鲜分选的CD34+细胞于当日(0d),在含病毒滴度107 TU、Polybrene 2μg/mL的opti-MEM培养液中,细胞和病毒混合液于平底12孔板孔中,200×g离心1h,离心后继续共培养8h,再换新的病毒液200×g离心1h,共培养8h。按照含细胞因子的液体培养基∶半固体培养基=1∶1的比例配置转染后培养基,继续培养,可以获得较高感染率。感染病毒后的CD34+干细胞培养14d后,与未感染的CD34+细胞相似,可以形成各类血细胞集落。结论优化的慢病毒转染方法可以有效感染CD34+造血干细胞,而不影响干细胞的分化功能。

• 单位
  四川大学华西医院