存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

作者：朱雄鹏; 陈志哲; 林旭; 胡建达; 李纯团; 杨婷; 许贞书; 吕璐璐; 陈彩平; 张浪辉

来源：中国实验血液学杂志, 2006, (04): 791-794.

DOI：10.3969/j.issn.1009-2137.2006.04.035

• 腺病毒载体
• 存活蛋白基因
• 树突状细胞

本研究旨在构建含有人存活蛋白(survivin)基因的重组腺病毒载体,并探讨其在转染树突状细胞中的表达。以质粒pcDNA3.0-survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全长序列。PCR产物回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pShuttle-CMV-survivin。通过双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pShuttle-CMV-survivin转化E.coliBJ5183菌(含腺病毒骨架质粒)并进行同源重组,然后筛选阳性克隆,提取质粒,将此重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,将病毒上清转染树突状细胞,应用Westernblot方法分析survivin的表达。结果表明成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.65×109pfu/ml。Westernblot鉴定显示,经重组腺病毒转染的DC可有效表达survivin。结论含survivin基因的重组腺病毒载体的构建成功,为下一步开展抗白血病免疫研究奠定实验基础。

• 单位
  泉州市第一医院; 福建医科大学附属协和医院; 福建医科大学