利用CRISPR/Cas9技术缺失MDV分离株meq基因的研究

作者：张峰; 于正浩; 兰兴鸽; 张艳萍; 王永强; 高立; 高玉龙; 李凯; 祁小乐; 崔红玉; 潘青; 王笑梅; 刘长军^*

来源：中国家禽, 2019, 41(09): 26-32.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2019.09.005

• MDV
• CRISPR/Cas9
• 基因编辑
• meq基因

鸡马立克氏病病毒(MDV)是一种能够引起鸡肿瘤的疱疹病毒,具有严格的细胞结合特性,对其基因组编辑较为困难。研究利用CRISPR/Cas9技术对中国MDV分离株基因组中的meq基因进行缺失。依据中国MDV分离株BS/15株的meq基因序列,设计了8条靶向meq基因的小向导RNA(sgRNA),分别克隆到pX330质粒中,构建表达靶向meq基因sgRNA的质粒pMeqsgRNA。通过pMeq-sgRNA转染、测序分析方法初步评价sgRNA切割效果,选择了两条适合的sgRNA。在鸡胚成纤维细胞(CEF)上同时转染上述筛选的2个pMeq-sgRNA质粒,接种MDV分离株BS/15株,通过PCR检测筛选meq基因缺失克隆株,成功克隆到一株meq基因缺失株。序列分析证明获得的MDV重组毒株确定meq基因序列已被敲除。体外试验证明该MDV重组毒株与亲本毒株在CEF上具有相似的复制能力。研究提供了一种简单、快捷的编辑MDV基因的方法,为MDV功能基因、分子进化和新型基因工程疫苗的研究提供了技术支持。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室