激活转录因子5的克隆及其在真核细胞中的表达定位

作者：叶雄俊; 常智杰; 林桂亭; 张志文; 辛殿祺; 王晓峰; 郭应禄

来源：中华实验外科杂志, 2005, 22(06): 705-707+771.

DOI：10.3760/j.issn:1001-9030.2005.06.024

• 激活转录因子5
• 克隆
• 基因表达

目的克隆激活转录因子(ATF)5,构建其真核表达载体,观察其在细胞中的表达定位。方法根据人ATF5的cDNA序列设计引物,通过巢式PCR扩增ATF5全长及其N端(ATF5/N)和C端(ATF5/C),构建重组表达质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C及融合绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-ATF5。将表达质粒转染293T和Cos7细胞,Westernblot检测其表达情况,荧光显微镜观察ATF5在293T和Hela细胞的定位。结果巢式PCR产物与预期大小一致,重组质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C能表达携带Myc标签的蛋白Myc-ATF5、Myc-ATF5/N和Myc-ATF5/C,分子量分别为52、35和43×103。荧光显微镜观察发现融合了GFP的ATF5蛋白定位在细胞核。结论成功的克隆和表达ATF5基因为进一步研究其在肾肿瘤发生、发展过程中的作用奠定了基础。

• 单位
  北京大学; 北京大学人民医院