科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的:构建重组人组织激肽释放酶7(KLK7)表达载体,建立稳定过表达KLK7的前列腺癌细胞株PC-3,并研究其细胞侵袭性。方法:将扩增后的KLK7cDNA克隆到表达载体pcDNA3.1上;使用限制性内切酶酶切后,DNA测序验证。然后,通过脂质体法转染人前列腺癌细胞株PC-3;选用G418进行筛选,并扩大培养每个单克隆细胞,进而建立稳定转染后的KLK7单克隆细胞株PC-3;Western blot检测目的蛋白的表达。通过细胞侵袭性试验了解其细胞侵袭性。结果:①通过酶切鉴定、DNA测序分析并证明,成功构建pcDNA3.1-KLK7表达载体;②成功获得稳定过表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株PC-3;③Western blot结果显示:经过pcDNA3.1-KLK7转染后的细胞与未转染的细胞表达量比较有统计学差异(P<0.01);④细胞侵袭性试验结果显示:转染后的细胞侵袭性高于未转染的细胞。结论:成功的建立pcDNA3.1-KLK7表达载体及稳定过表达KLK7的前列腺癌PC-3单克隆细胞株,同时证明其细胞侵袭性,为研究KLK7在前列腺癌发生、发展中的作用奠定了基础。
- 单位
