核小体Th表位和CTLA4Ig双基因共表达真核表达载体的构建

作者：周春丽; 郝进; 郝飞; 吴军; 贺伟峰

来源：生物医学工程与临床, 2006, (06): 387-390+405.

DOI：10.13339/j.cnki.sglc.2006.06.017

• 核小体
• Th表位
• CTLA4Ig
• 融合蛋白

目的将核小体Th表位与CTLA4Ig融合基因融合,研究CTLA4Ig作为真核表达载体的可行性。方法用touchdownPCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入核小体Th表位(H2B14-28)。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1穴+雪,构建pcDNA3.1穴+雪-CTLA4Ig-H2B。将表达质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测转染细胞裂解上清中融合蛋白的表达。将构建表达CTLA4Ig-H2B的减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207喂饲BALB/c小鼠,取脾脏进行免疫组化鉴定重组蛋白在动物体内的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。在pcDNA3.1穴+雪-CTLA4Ig-H2B质粒转染后48h细胞裂解上清中,检测到CTLA4Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合。重组蛋白在BALB/c小鼠脾脏免疫细胞胞浆中有阳性表达。结论成功构建了能稳定表达核小体Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学