摘要
目的:本实验通过观察复方地芬诺酯诱导的STC模型大鼠结肠组织中ICC自噬情况,探讨化瘀通便汤治疗STC机制及其量效关系。方法:选择成年72只SD大鼠,随机分为6组,空白对照组12只大鼠给予纯净水灌胃,剩余5组用复方地芬诺酯灌胃制备慢传输型便秘大鼠模型,造模4周后随机抽取1组实验组,和空白组一起收集粪便,采用检测粪便含水率和碳末推进率的方法进行肠道功能障碍的测定。确定造模成功后除模型对照组外,3组分别给予低、中、高剂量化瘀通便汤治疗,1组给予西药治疗,模型组予等量纯水灌胃,对6组大鼠各项指标进行观察,包括大鼠一般情况(精神状况、进食量、饮水量、首次排黑便时间),利用透射电镜观察ICCs形态变化,并使用免疫组化法、免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测ICC及自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3B、p62的表达。结果:1.与空白组相比,造模组大鼠一般情况较差,首次排黑便时间延长(P<0.01)。2.相较于空白对照组,模型对照组Cajal间质细胞出现严重损伤,各干预组Cajal间质细胞的损伤均有所改善和修复,化瘀通便汤高剂量组Cajal间质细胞改善和修复最明显。3.与空白组相比,模型组ICC细胞结构明显改变,自噬增加;Beclin1、LC3B、Atg5表达上升,p62表达下降(P<0.01),与模型组相比,低、中、高剂量化瘀通便汤组蛋白表达,有明显差异统计学意义(P<0.01),高剂量化瘀通便汤与低、中组间差异显著(P<0.01)。结论:1.运用复方地芬诺酯成功复制STC大鼠模型,且STC大鼠模型稳定性好,安全性高,可用于后期实验研究。2.化瘀通便汤能明显改善STC症状,修复Cajal间质细胞结构,主要机制可能与下调Beclin1、LC3B、Atg5表达而抑制ICC过度自噬,上调p62表达促进ICC修复有关,从而能刺激肠道蠕动,增加肠道水分。3.化瘀通便汤治疗STC与用药剂量有一定联系,高剂量通便汤治疗STC效果最佳。
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单位辽宁中医药大学; 辽宁中医药大学附属医院