人Notch信号通路中Jagged1基因的克隆与真核表达

作者:叶健斌; 陈中标; 梁来妹; 杨宜; 宁立军; 宁云山; 李妍
来源:生物技术, 2015, 25(05): 437-441.
DOI:10.16519/j.cnki.1004-311x.2015.05.0087

摘要

[目的]克隆人Notch信号通路中配体Jagged1基因并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获取Jagged1基因,并克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4。经酶切、PCR和测序鉴定后,将重组质粒Jagged1-pCMV-Tag4瞬时转染HEK 293T细胞,通过Q-PCR和Western blot检测目的蛋白的表达。[结果]成功构建了真核表达质粒Jagged1-pCMV-Tag4并在HEK 293T细胞中瞬时表达。[结论]Jagged1在HEK 293T细胞中实现瞬时表达,为稳定表达和进一步研究Jagged1/Notch信号通路奠定基础。

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