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摘要
传染性法氏囊病（IBD）是由传染性法氏囊病毒（IBDV）引起的一种高度传染性疾病，以雏鸡法氏囊萎缩、腿肌出血等为特征性病变，给世界家禽产业造成重大经济损失。目前，由新型变异株引起的IBD在我国呈现流行趋势，其迅速扩散对防控造成困难。为建立基于IBDV VP2蛋白的免疫学诊断技术，本研究以新型变异毒株IBDV-LY21/2为模板，扩增其VP2基因，随后构建重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-IBDV-VP2并转化BL21（DE3）大肠杆菌菌株诱导表达，通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测重组蛋白His-VP2的表达情况，并对其进行纯化和浓度测定。将His-VP2免疫BALB/c小鼠后，采用iELISA检测血清抗体效价，最后制备单克隆抗体并对其鉴定。结果显示，获得的重组蛋白His-VP2分子量约为50 kDa，浓度为8 mg/mL；通过两次亚克隆获得3株杂交瘤细胞株1G10F12、3E3E9、4D12G12，且重链均为IgG1型，轻链均为κ型；其中1G10F12、3E3E9可与重组蛋白Myc-VP2产生Western blot和IFA反应，而4D12G12只能与其产生IFA反应。本研究为IBD诊断方法的建立奠定了基础，同时为深入研究VP2蛋白的功能提供生物学工具。
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