人胰岛素原基因的包装及增殖

作者：袁凤山; 刘兆喆; 吴志香; 杜宁

来源：中国医科大学学报, 2004, 33(2): 144-146.

DOI：10.3969/j.issn.0258-4646.2004.02.020

• 人胰岛素原基因
• 逆转录病毒载体
• 包装细胞
• 病毒滴度

目的:用PA317包装细胞包装突变人胰岛素基因原质粒,并检测其增殖情况.方法:用脂质体转染法将PLXSN-MPINS质粒转染至PA317包装细胞,用G418筛选出阳性PA317包装细胞克隆并测定胰岛素原基因浓度,用TRIZOL法提取未转染和转染后PA317细胞的基因组DNA,PCR检测突变人胰岛素基因的整合情况.结果:(1)用脂质体转染法获得G418阳性PA317包装细胞克隆;(2)该细胞克隆获高滴度的胰岛素原基因浓度;(3)PCR方法在转染后PA317基因组中检测到突变人胰岛素原基因.结论:脂质体转染法是一种操作简便且行之有效的转染方法.PA317包装细胞系可成功包装突变人胰岛素原基因质粒并可获得高滴度表达,为1型糖尿病基因治疗的进一步实验研究奠定了基础.

• 单位
  辽宁中医学院; 中国医科大学附属第一医院