HLA-G5慢病毒过表达载体构建和鉴定及对人羊膜间充质干细胞的感染效率分析

作者：宫黎明; 周满红; 廖富团; 徐绍华; 罗克燕; 董世桃; 程宇凌; 杨智敏

来源：遵义医学院学报, 2018, 41(02): 165-175.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2018.0033

• 慢病毒
• 间充质干细胞
• HLA-G
• 免疫耐受
• 基因工程

目的构建过表达HLA-G5的慢病毒载体,感染人羊膜间充质干细胞(human amnion drived mesenchymal stem cells,h AD-MSCs),为后续探索HLA-G5在h AD-MSCs诱导免疫耐受中的作用和机制,并为探索以其作为生物反应器生产HLA-G5提供前期实验基础。方法人工合成HLA-G5全长序列,定向接入真核表达载体p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP,转化入大肠杆菌,酶切鉴定和测序正确后进行慢病毒包装。按照慢病毒滴度梯度感染h AD-MSCs,DAPI复染细胞核,荧光显微镜下观察感染效率。MTS检测连续感染24 h后慢病毒对h AD-MSCs的毒性。ELISA法检测感染后细胞上清中的可溶性HLA-G5表达。结果 (1)酶切鉴定和测序结果显示,HLA-G5表达质粒质量合格,序列比对与设计序列符合率100%;(2)感染h AD-MSCs后有较高的感染效率(接近100%);(3)构建的慢病毒毒性较小;(4)感染后h AD-MSCs分泌可溶性HLA-G5增高。结论本研究中构建的HLA-G5慢病毒过表达载体能够安全高效的感染h AD-MSCs,为进一步研究其体内外诱导免疫耐受的作用和机制,并将其作为细胞反应器生产HLA-G5的前期工艺奠定了基础。

• 单位
  遵义医学院附属医院