外源前列腺特异性膜抗原纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析

作者：杜文倩; 张萌; 唐语彤; 林晓蕊; 潘慕垚; 刘宝琴^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2021, 28(23): 1792-1804.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.23.06

• 前列腺特异性膜抗原
• N-糖基化修饰
• 叶酸水解酶1
• 位点特异性N-糖基化修饰分析
• 前列腺癌

目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1基因连接到真核表达载体pcDNA3;双酶切鉴定及测序无误后,利用转染技术将真核表达载体转染进293细胞系,肽-N-糖苷酶F(PNGase F)酶切鉴定PSMA蛋白;免疫沉淀技术纯化293细胞系外源过表达PSMA蛋白,质谱分析位点特异性N-糖基化修饰谱。结果成功构建PSMA蛋白真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1;293细胞系中外源过表达PSMA蛋白,PNGase F未处理PSMA蛋白相对分子质量为100×103,酶切处理之后其相对分子质量约为85×103,符合预期。免疫纯化获得外源过表达PSMA蛋白之后,LC-MS揭示重组PSMA蛋白中的大多数N-糖基化修饰位点都有寡糖链占位,且高甘露糖型、杂合型及复合型组成有一定差异。结论成功完成PSMA蛋白真核表达载体的构建、表达、纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析,为后续靶向PSMA的肿瘤治疗提供基础科研数据。

• 单位
  生命科学学院; 中国医科大学