毛兰素通过CCL2-CCR2信号轴介导的免疫逃避抑制食管癌细胞的恶性进展

作者：王静; 袁兆林; 李伟^*

来源：河北医学, 2023, 29(10): 1585-1593.

• 毛兰素
• CCL2-CCR2信号轴
• 免疫逃避
• 食管癌

目的:探讨毛兰素对食管癌(EC)细胞恶性进展的影响及其作用机制。方法:收集2021年3月至2022年12月期间在本院根治手术治疗EC患者(40例)的癌组织及距离癌组织3cm处的癌旁组织；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测EC组织及细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平；以不同浓度的毛兰素(0、10、20、40、60、80、160nmoL/L)干预ECA109细胞48h, MTT法检测细胞增殖，筛选最佳干预浓度；将ECA109细胞分为control组(正常培养)、毛兰素低、中、高剂量组(20、40、60nmoL/L)、pcDNA组(转染pcDNA3.1)、pcDNA-CCL2组(转染pcDNA3.1-CCL2),MTT法、平板克隆实验、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡；ECA109细胞和CD8+T细胞共培养后，分为T细胞组、共培养组、毛兰素组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组，MTT、流式细胞仪检测CD8+T细胞增殖、凋亡，酶联免疫吸附(ELISA)法检测CD8+T细胞上清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、程序性死亡配体1(PD-L1)及CCL2-CCR2信号通路蛋白表达。结果:在EC组织和EC细胞中CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);与control组比较，毛兰素低、中、高剂量组ECA109细胞中OD490值、集落形成数、迁移与侵袭细胞数、CCL2、CCR2 mRNA及PCNA、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白表达水平显著降低，凋亡率、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与pcDNA组比较，pcDNA-CCL2组ECA109细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05);与T细胞组比较，共培养组CD8+T细胞OD490值、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平降低，细胞凋亡率增加(P<0.05);与共培养组比较，毛兰素组CD8+T细胞OD490值、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平升高，细胞凋亡率降低(P<0.05);与pcDNA组比较，pcDNA-CCL2组CD8+T细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论:毛兰素可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路，抑制EC细胞的恶性进展。

• 单位
  滕州市中心人民医院