5-氮杂-2'-脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体启动子甲基化水平抑制HepG2细胞载脂蛋白A表达

作者：马小峰; 谭剑凯; 张海; 何兴兰; 瞿凯; 雷建军; 王佐

来源：中国动脉硬化杂志, 2014, 22(11): 1081-1086.

• 载脂蛋白A
• 脂蛋白(a)
• 5-氮杂-2’-脱氧胞苷
• DNA甲基化
• 法尼酯X受体

目的探索5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)的DNA去甲基化作用对Hep G2细胞载脂蛋白A(Apo A)表达的影响,并探讨其作用机制。方法选取Apo A高表达细胞株Hep G2细胞为研究对象。噻唑蓝法测定Hep G2经不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)的5-Aza-CdR处理不同时间(12、24、48、72、96 h)后细胞相对存活率;Western blot检测5-Aza-CdR不同浓度组Hep G2细胞Apo A、法尼酯X受体(FXR)的表达水平;逆转录聚合酶链反应检测Apo A、FXR的mRNA水平;亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5-Aza-CR不同浓度组的甲基化水平。结果与对照组相比,5-Aza-CR 10、20、40μmol/L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异(P>0.05),而在20μmol/L 96 h组、40μmol/L 96 h组、80μmol/L 24 h组、80μmol/L 48 h组、80μmol/L 72 h组以及80μmol/L 96 h组Hep G2细胞存活率存在统计学差异(P<0.05),选取040μmol/L为5-Aza-CdR的安全浓度范围,072 h为合适作用时间。与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调Apo A蛋白表达,其中以40μmol/L组最为明显(P<0.05);与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调Apo A mRNA表达,其中以40μmol/L组最为明显(P<0.05)。随着5-Aza-CdR浓度的递增,FXR基因启动子甲基化水平呈下降趋势,其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58.3%,而40μmol/L组FXR基因启动子甲基化率仅为8.3%。结论 5-Aza-CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达,从而下调Apo A的表达。

• 单位
  南华大学; 南华大学附属南华医院