寡核苷酸片段载体的酶切连接和无缝克隆构建方法比较

作者：邹强; 邢体坤; 张静静^*

来源：中国医药科学, 2023, 13(12): 183-187.

• 酶切连接
• 无缝克隆
• 寡核苷酸
• 载体构建

目的 比较酶切连接和无缝克隆方法在构建pCGS3-CK载体上的优缺点，为寡核苷酸片段载体的构建提供参考。方法 酶切连接是需要合成两条互补的寡聚核苷酸单链，然后经过退火形成具有黏性末端的双链结构片段，在DNA连接酶的作用下与具有相同酶切的线性化载体连接，形成环状质粒。无缝克隆是在目标序列两端各加上15～20个与载体序列同源性的碱基，然后经过退火形成双链结构的目的片段，在重组酶的作用下与线性化的载体连接，形成环状质粒。结果 从阳性率角度进行比较，酶切连接的阳性率为95.65%，而无缝克隆的阳性率为89.13%。结论 与无缝克隆方法相比，用酶切连接方法构建寡核苷酸片段载体阳性率高，实验成本低。