微RNA-144抑制剂通过Toll样受体4/核因子κB信号通路减轻大鼠反流性食管炎食管黏膜损伤

作者：王宝珊; 柳刚; 王雯; 林燕芳; 姚荔嘉^*

来源：海军军医大学学报, 2022, 43(08): 881-887.

DOI：10.16781/j.CN31-2187/R.20210667

• 微RNA-144
• 反流性食管炎
• Toll样受体4
• 核因子κB
• 炎症
• 细胞凋亡

目的 探讨微RNA(miRNA)-144抑制剂能否减轻大鼠反流性食管炎(RE)食管黏膜的损伤及可能机制。方法 取18只雄性SD大鼠，随机分为假手术组、RE组、miRNA-144抑制剂组，每组6只。RE组、miRNA-144抑制剂组采用前胃结扎联合幽门限制法建立慢性RE大鼠模型，造模后miRNA-144抑制剂组大鼠通过尾静脉注射miRNA-144 antagomir抑制体内miRNA-144的表达。应用qPCR法检测miRNA-144抑制剂的有效性及各组大鼠食管组织中Toll样受体4(TLR4)、NF-κB、核因子κB抑制蛋白α(IκBα) mRNA的表达变化。采用ELISA法检测大鼠食管组织中IL-6、IL-8、TNF-α的含量，蛋白质印迹法检测密封蛋白3(CLDN3)的表达，免疫组织化学染色检测cleaved caspase 3、Ki-67蛋白的表达，TUNEL法检测食管黏膜细胞凋亡情况。结果 与假手术组相比，RE组大鼠食管组织中TLR4、NF-κB、IκBα mRNA表达水平升高(P<0.05，P<0.01)，炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α 的含量(P均<0.05)及凋亡相关蛋白cleaved caspase 3的表达增加(P<0.01)，食管黏膜细胞凋亡增加(P<0.01)，食管黏膜屏障指标CLDN3蛋白的表达减少(P<0.01)。与RE组相比，抑制miRNA-144表达可降低大鼠食管组织中TLR4、NF-κB、IκBα mRNA的表达(P均<0.05)，减少炎症相关因子IL-6、IL-8、TNF-α 的含量(P均<0.05)，抑制RE大鼠食管黏膜细胞凋亡(P<0.05)，并增加CLDN3蛋白的表达(P<0.01)。但抑制miRNA-144不影响食管黏膜细胞的增殖，miRNA-144抑制剂组Ki-67阳性细胞数与RE组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miRNA-144抑制剂可减轻RE大鼠食管黏膜的损伤，这种作用可能主要通过TLR4/NF-κB信号通路来实现。