多重实时荧光定量PCR方法在高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测中的应用

作者：王晓明; 戴卫健; 余道军; 刘宏钱

来源：临床检验杂志, 2020, 38(11): 841-844.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2020.11.11

• 人乳头瘤病毒
• 高危型人乳头瘤病毒
• E6/E7 mRNA
• 多重实时荧光定量PCR

目的建立一种基于多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)技术的可同时检测14种高危亚型人乳头瘤病毒(HPV16、18、31、33、35、39、52、45、51、56、58、59、66、68)癌基因E6/E7 m RNA的方法。方法对14种高危型HPV各自的E6/E7基因序列区域设计特异性引物和探针,配以优化的反应体系,形成HPV E6/E7 m RNA检测体系,评价方法检出限、特异性。收集223例临床样本,分别用自建的一步法MRT-PCR法与转录介导等温核酸扩增(TMA)技术(Aptima?HPV试剂盒)检测HPV E6/E7m RNA,同时评估HPV E6/E7 m RNA检测结果与薄层液基细胞学检测、宫颈组织病理学检测结果的一致性。结果建立的检测方法对常见的低危型HPV无交叉检出,且对14种高危型HPV的检测限可达10～100 copies/μL。该方法检测223例临床标本的结果与Aptima?HPV检测结果相比,一致性较好(Kappa=0.910)。以组织病理结果为CINⅡ及以上的作为阳性,MRT-PCR法临床检测敏感性为84.0%,特异性为94.4%,阳性预测值为65.6%,阴性预测值为97.9%。结论建立的MRT-PCR方法具有特异性好、灵敏度高和稳定性好等优点,为HPV临床快速检测以及宫颈病变筛查提供了一个有效的技术平台。

• 单位
  浙江中医药大学; 杭州市第一人民医院; 浙江大学