双荧光标记的肺癌皮下移植裸鼠模型的建立

作者：樊红莲; 刘明珠; 闵静婷; 李红俊; 杨小淮; 李永海; 李正红^*

来源：中华肿瘤杂志, 2019, 41(11).

• 肺肿瘤
• 动物模型
• 荧光素酶
• 近红外蛋白
• 活体成像

目的建立荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)双标记的肺癌皮下移植裸鼠模型。方法采用Gateway法构建表达Luc和iRFP的慢病毒载体, 经酶切测序验证后, 制备慢病毒, 感染肺癌A549细胞。嘌呤霉素筛选阳性A549细胞(即mA549细胞)并进行扩增, 荧光显微镜下观察Luc和iRFP的表达, 免疫荧光检测细胞表面c-Met蛋白的表达。将A549和mA549细胞分别接种至裸鼠皮下, 每组6只, 采用活体成像技术观察瘤体生长和荧光表达情况, HE染色和免疫组化染色评估成瘤状况。结果成功构建了稳定表达Luc和iRFP的mA549细胞系。荧光显微镜下观察到mA549细胞中iRFP与Luc成功表达。免疫荧光检测显示, A549细胞和mA549细胞均可表达c-Met蛋白。mA549细胞接种裸鼠后, 模型生长周期适中, 成瘤率为100%;mA549细胞移植瘤的生长趋势与A549细胞移植瘤无明显差异(P>0.05)。HE染色显示, mA549与A549细胞移植瘤的细胞形态和组织结构相同。免疫组化染色显示, A549和mA549细胞移植瘤均表达c-Met蛋白。结论成功构建了稳定的、可实时监测的iRFP-Luc-A549肺癌细胞裸鼠模型。

• 单位
  蚌埠医学院; 蚌埠医学院第一附属医院