鸭肠炎病毒疫苗株UL41和UL40基因间隔区作为其复制非必需区的鉴定

作者：刘静; 赵玉博; 焦晨晨; 陈普成; 胡玉珍; 姜永萍; 陈化兰; 柳金雄^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(09): 996-1000.

• 鸭肠炎病毒
• CRISPR/Cas9
• 复制非必需区

为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区，本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40，转染后拯救重组病毒，并对其进行噬斑纯化。通过PCR和荧光显微镜观察对重组病毒进行鉴定，结果显示，经拯救得到表达RFP的重组病毒rDEV-ul4140RFP；所有代次的rDEV-ul4140RFP在显微镜下均能观察到红色荧光，表明重组病毒中的RFP基因稳定存在。将rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEFs)后，收集24 h、48 h、72 h、96 h的细胞和上清，检测TCID50并绘制生长曲线。结果显示，rDEV-ul4140RFP在CEF中的生长曲线和亲本DEV疫苗株无显著差异。利用SPF鸭对rDEV-ul4140RFP的免疫保护效果进行评价。攻毒保护实验结果显示，rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株均能对SPF鸭提供100%的免疫保护。本研究结果证实DEV基因组UL41和UL40基因间隔区可作为外源基因的插入位点，为以DEV为载体构建相关重组疫苗提供参考依据。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 农业部