EV71病毒P1和3CD基因共表达重组杆状病毒双顺反子穿梭载体的构建及鉴定

作者：蔡春林; 姚相杰; 赵洁玲; 卓菲; 黎剑华

来源：广东医学, 2012, 33(18): 2725-2727.

DOI：10.3969/j.issn.1001-9448.2012.18.012

• 肠道病毒71型
• 杆状病毒
• 类病毒颗粒
• 疫苗

目的 通过克隆EV71病毒结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的重组杆状病毒表达载体.方法 设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至含有CMV启动子的杆状病毒穿梭载体pFastBacDual-CMV上,命名为pFBCMV-IRES.从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经RT-PCR技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,定向克隆至杆状病毒穿梭载体pFBCMV-IRES的IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠杆菌DH5α中,经PCR和双酶切鉴定转化菌落.结果 通过对重组杆状病毒穿梭载体pFBCMV-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,证明共表达EV71病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒双顺反子穿梭载体构建成功.结论 共表达EV71病毒P1和3CD基因重组杆状病毒双顺反子穿梭载体的成功构建,将为下一步制备EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础.

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心; 深圳市罗湖区疾病预防控制中心