一种快速构建基因多个点突变体方法的建立

作者：陈立涵; 李玮妮; 张浩; 程龙; 叶棋浓

来源：生物化学与生物物理进展, 2013, (07): 678-685.

• 反向PCR
• SRrp53
• 多位点突变 inverse PCR
• SRrp53
• multiple-site mutations

蛋白质内部多个位点的翻译后修饰在基因的功能调节过程中发挥重要作用,基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,因此,高效、快速构建基因的多个点突变体在基因的功能研究中意义重大.本研究在建立了对目的基因进行高效准确的单点突变方法的基础上,以SRrp53点突变体的构建为例,设计了新型的以反向PCR为基础的多个点突变的实验流程,获得的多位点突变体质粒经测序后均与预期相符,将测序正确的多位点突变体质粒转染293T细胞后,均表达了分子质量正确的蛋白质.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因多个点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础.

• 单位
  中国人民解放军军事医学科学院