CdaR-DAC信号系统调控钩端螺旋体合成第二信使分子c-di-AMP

作者：方葆; 李阳; 严杰; 胡玮琳^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2018, 38(12): 881-885.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2018.12.001

• 钩端螺旋体
• c-di-AMP
• DAC
• CdaR

目的确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA3304基因产物DAC合成c-di-AMP的活性,LA3303基因产物CdaR增强DAC酶活。方法采用PCR扩增问号钩体黄疽出血群赖型赖株LA3304基因,并构建其原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rDAC。采用高效液相色谱法(HPLC)检测rDAC环化ATP底物为c-di-AMP的活性。采用细菌双杂交法检测CdaR与DAC相互作用情况。构建细菌共表达系统,结合HPLC法检测CdaR增强DAC酶活情况。结果所构建的问号钩体赖株LA3304基因原核表达系统在IPTG诱导下能高效表达rDAC,Ni-NTA亲和层析法提纯的rDAC经SDS-PAGE后显示为单一蛋白条带。rDAC具有体外合成ATP底物为c-di-AMP的功能。CdaR与DAC存在相互作用,CdaR可显著增强DAC酶活(P<0.05)。结论LA3304基因产物DAC具有c-di-AMP合成酶活性,CdaR可增强DAC活性,并与DAC构成CdaR-DAC信号系统,共同参与调节钩体c-di-AMP合成。

• 单位
  苏州大学附属儿童医院; 浙江大学