问号钩端螺旋体LA2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究

作者：张琴超; 孙爱华; 张金良; 胡玮琳; 严杰; 林旭瑷^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2019, (07): 519-526.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2019.07.006

• 问号钩端螺旋体
• LA2144基因
• 血小板活化因子乙酰水解酶
• 磷脂酶A2
• 酶活性

目的 了解问号钩端螺旋体LA2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和磷脂酶A2(PLA2)的酶活性。方法 生物信息学软件预测问号钩端螺旋体赖株LA2144基因跨膜区、信号肽和结构域。构建无信号肽LA2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2144后复性。采用分光光度法检测rLep2144水解PAF-AH底物2-thio PAF的活性及其Km和Kcat值以及水解PLA2底物花生四烯酸硫代卵磷脂的活性。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot法检测问号钩端螺旋体感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)后LA2144基因转录、蛋白质表达和外分泌情况。结果 LA2144基因无跨膜区但有信号肽和SGNH水解酶超家族结构域。所构建的无信号肽LA2144基因原核表达系统能高效表达rLep2144,提纯后的rLep2144在分离胶上为单一蛋白质条带并成功复性。rLep2144有较强PAF-AH活性,其Km和Kcat值分别为688.235 μmol/L和0.976/s,但PLA2活性较弱。问号钩端螺旋体感染HUVEC和EOMA后LA2144基因mRNA转录和蛋白质表达水平迅速升高(P<0.05)且外分泌。结论 问号钩端螺旋体LA2144基因产物具有较强PAF-AH活性和一定的PLA2活性,可在钩端螺旋体病出血性病变和炎症反应中发挥作用。

• 单位
  浙江大学; 杭州医学院; 金华职业技术学院