慢病毒介导Notch1基因shRNA沉默大鼠骨髓间充质干细胞Notch信号通路的表达

作者：闫锦玉; 邢万红^*

来源：中国组织工程研究, 2019, 23(17): 2659-2664.

• 骨髓间充质干细胞
• Notch基因
• 慢病毒载体
• RNA干扰
• Notch信号通路
• 山西省自然科学基金

背景:对于骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化中Notch信号通路的机制研究较多,但是沉默Notch信号通路在工程化心肌样组织血管网络中的机制研究还比较少。目的:构建慢病毒载体介导Notch1基因sh RNA表达体系,观察骨髓间充质干细胞中r Notch基因沉默效果。方法:构建p LV[shRNA]-EGFP:T2A:Puro-U6]{rNotch1[shRNA]19 nt}(PLV-Notch)和p LV[sh RNA]-EGFP:T2A:Puro-U6>ScrambleshRNA(PLV-Scramble)拼装慢病毒表达载体,并将该慢病毒载体包装质粒形成混合物共转染到HEK-293T细胞中。收集慢病毒悬液,通过定量PCR检测重组病毒滴度。将构建的PLV-Notch与PLV-Scramble分别感染骨髓间充质干细胞,经荧光显微镜观察和RT-qPCR、Western blot鉴定转染后两组骨髓间充质干细胞中增强型绿色荧光蛋白基因和目的基因rNotch1表达情况。结果与结论:慢病毒载体滴度大于1×108 TU?mL,稳定转染筛选得到成熟的细胞株。病毒转导效果良好,荧光率达80%,rNotch1基因在干扰组中的表达量是scrambled对照组的75.2%。由此可见,慢病毒介导转染rNotch1基因的骨髓间充质干细胞稳转株构建成功,并对Notch信号通路的表达有沉默作用。

• 单位
  山西医科大学