FLOT1基因小干扰RNA联合姜黄素在体外诱导肾癌细胞凋亡的机制

作者：李帅; 顾朝辉; 冯子煜; 兰东阳; 姚文诚; 刘秉乾; 贾占奎; 杨锦建; 武玉东^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(10): 1908-1911.

• 肾癌
• FLOT1基因
• 姜黄素
• 脱噬作用
• 信号转导与转录激活因子-3信号通路

目的探讨FLOT1基因小干扰RNA(siRNA)联合姜黄素对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。方法以LipofectamineTM 2000为载体,将FLOT1-siRNA转染人肾癌786-0细胞,Western blot检测转染siRNA后的细胞中FLOT1的蛋白表达。后续研究分FLOT1-siRNA组、姜黄素组和FLOT1-siRNA+姜黄素组进行细胞干预,并设置空白对照组,细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞仪分别检测4组细胞活力及凋亡率;H2DCFHDA探针检测4组细胞ROS含量;Western blot检测4组细胞磷酸化信号转导与转录激活因子-3 (p-STAT3)及信号转导与转录激活因子-3 (STAT3)信号通路下游增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白表达。结果 FLOT1-siRNA转染786-0细胞后FLOT1的表达(0. 087±0. 010)明显受到抑制,与空白对照组(0. 454±0.038)比较差异有统计学意义(t=16.177, P=0. 000)。si-FLOT1 (0.491±0. 053)或姜黄素(0. 542±0. 058)均可抑制786-0细胞活力,诱导786-细胞凋亡(18. 22±1. 07)%、(12. 39±0. 86)%及ROS产生(189.5±8.2)、(147.7±7.1),下调p-STAT3(0.118±0.014)、(0.110±0.012)和PCNA(0. 229±0.025)、(0. 302±0.034)表达,上调bax(0.206±0. 021)、(0.123±0. 014)表达,与NC组比较差异均有统计学意义(0.792±0.065)、(1.62±0.25)%、(57.7±3.5)、(0.202±0.023)、(0. 577±0. 049)、(0. 069±0. 010)(t=6. 736、7. 378、12. 796、10.112、7.186、2. 832, P=0. 000、0. 000、0. 000、0.000、0.000、0. 022),联合使用si-FLOT1和姜黄素对786-0细胞活力(0.378±0.044)抑制、细胞凋亡(24.18±1.22)%及ROS产生(249.3±9.4)诱导、p-STA13(0.054±0.008)和PCNA表达(0.135±0.016)下调及bax表达(0.411±0.038)上调作用更明显,且与单一的si-FLOT1或姜黄素比较差异均有统计学意义(t=5.132、4.491、3.456、6.140、10. 752、15.106, P=0. 001、0. 002、0.009、0. 000、0.000、0.000)。结论 FLOT1 siRNA或姜黄素均可抑制肾癌细胞活力,诱导细胞凋亡,两者合用对细胞活力及凋亡作用更明显,机制可能与细胞内ROS提高及抑制STAT3信号有关。

• 单位
  郑州大学第一附属医院