HDAC3在原代大鼠心肌细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用：与自噬的关系

作者：邱珍; 李璐; 赵博; 雷少青; 夏中元^*

来源：中华麻醉学杂志, 2021, 41(10).

• 组蛋白脱乙酰基酶类
• 肌细胞, 心脏
• 糖尿病
• 低氧
• 自噬

目的评价组蛋白去乙酰化酶3 (HDAC3)在原代大鼠心肌细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用及其与自噬的关系。方法将1～3 d左右的新生SD乳鼠提取原代心肌细胞, 铺板。按随机数字表法分为5组(n=24):对照组(C组, 糖浓度5.5 mmol/L)、缺氧复氧组(H/R组)、高糖组(H组, 糖浓度30 mmol/L)、高糖缺氧复氧组(HH/R组)和高糖缺氧复氧+HDAC3抑制剂RGFP966组(HH/R+RG组)。采用50%葡萄糖注射液制备高糖培养基(终浓度为30 mmol/L)。H/R组细胞置于低氧环境(5%CO2-0.9%O2-94.1%N2)中培养6 h, 再置于常氧环境中复氧2 h制备心肌细胞缺氧复氧模型。HH/R+RG组于缺氧复氧前24 h加入RGFP966, 终浓度10 μmol/L。于细胞复氧2 h时, 采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清LDH活性;自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染下共聚焦显微镜检测细胞自噬水平;Western blot法检测心肌细胞HDAC3、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达, 计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与C组比较, H/R组和H组心肌细胞活力降低, 上清液LDH活性升高, H/R组自噬小体数增加, 心肌细胞HDAC3表达上调, p62表达下调, LC3 Ⅱ/I比值升高, H组自噬小体数减少, 心肌细胞HDAC3和p62表达上调, LC3 Ⅱ/I比值降低(P<0.05);与H/R组比较, HH/R组心肌细胞活力降低, 上清液LDH活性升高, 自噬小体数量降低, HDAC3和p62表达上调, LC3 Ⅱ/I比值降低(P<0.05);与H组比较, HH/R组心肌细胞活力降低, 上清液LDH活性升高, 自噬小体数量增加, HDAC3和p62表达上调, LC3 Ⅱ/I比值升高(P<0.05);与HH/R组比较, HH/R+RG组心肌细胞活力升高, 上清液LDH活性降低, 自噬小体数量增加, HDAC3和p62表达下调, LC3 Ⅱ/Ⅰ比值升高(P<0.05)。结论 HDAC3表达上调参与了原代心肌细胞高糖缺氧复氧损伤的过程, 与降低细胞自噬水平有关。

• 单位
  武汉大学人民医院