基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立

作者：闫磊; 潘巧; 赵雅芝; 郝文君; 李媛; 辛九庆^*

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(07): 716-720.

• 牛传染性胸膜肺炎
• 丝状支原体丝状亚种
• 间接ELISA

为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540 bp的0584基因,该基因是编码分子量为35 ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584基因的重组蛋白rP35,以牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清为一抗进行western blot分析,试验结果为阴性,但Dot-blot试验结果为阳性,证明该蛋白可能是Mmm特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白且具有反应原性。以r P35蛋白为包被抗原,通过反应条件优化初步建立了检测CBPP血清抗体的间接ELISA方法,特异性为88.0%,敏感性为89.8%,批内和批间变异系数均小于10%,与商品化试剂盒符合率为84.8%。本研究为研制CBPP血清检测试剂盒提供了一种候选蛋白。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 吉林农业大学; 兽医生物技术国家重点实验室; 动物科技学院