鸡TRAF3基因的克隆表达及多克隆抗体的制备

作者：李春平; 李拓凡; 万志敏; 邵红霞; 秦爱建; 叶建强^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2022, 43(04): 45-50.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2022.04.006

• 鸡源TRAF3
• 原核表达
• 真核表达
• 多克隆抗体

为探究鸡源肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TRAF3)的生物学功能，对鸡源TRAF3基因进行克隆表达并制备其多克隆抗体。将鸡TRAF3基因分别克隆入原核表达载体pGEX-6P-1和真核表达载体pcDNA3.1中构建出重组原核表达载体pGEX-6P-1-TRAF3和重组真核表达载体pcDNA3.1-TRAF3。构建的原核表达载体转化入大肠埃希菌BL21后经IPTG诱导，SDS-PAGE分析表明获得GST-TRAF3的融合表达蛋白，且融合蛋白主要表达于包涵体中。将纯化的GST-TRAF3蛋白免疫小鼠制备抗GST-TRAF3多克隆抗体。间接免疫荧光及Western blot试验表明，所制备的抗TRAF3多克隆抗体不仅能与转染pcDNA3.1-TRAF3的DF-1及LMH细胞中表达的外源性TRAF3反应，而且能有效识别LMH细胞内源性的鸡源TRAF3蛋白。该研究中鸡TRAF3基因的克隆、表达及其多克隆抗体制备为后续研究鸡TRAF3的功能奠定了基础。

• 单位
  扬州大学; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心