miR-124-3p靶向调控KLF6基因表达对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

作者：张虹; 陈颖平; 陈圣文

来源：眼科新进展, 2020, 40(02): 125-130.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2020.0030

• miR-124-3p
• KLF6
• 人晶状体上皮细胞
• 氧化应激
• 增殖
• 凋亡

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞增殖及凋亡的影响及其靶向调控Krüppel样因子6(Krüppel like factor 6,KLF6)的机制。方法按HLE-B3细胞处理方式的不同,将其分为HLE-B3组、HLE-B3+H2O2组、HLE-B3+H2O2+miR-NC组、HLE-B3+H2O2+miR-124-3p组、HLE-B3+H2O2+si-NC组、HLE-B3+H2O2+si-KLF6组、miR-124-3p+pcDNA3.1组、miR-124-3p+pcDNA3.1-KLF6组。利用MTT实验检测各组HLE-B3细胞增殖活性,流式细胞仪检测各组HLE-B3细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验验证miR-124-3p与KLF6的靶向关系。Western blot检测各组HLE-B3细胞中Cyclin D1、P21、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 H2O2可抑制人晶状体上皮HLE-B3细胞中miR-124-3p的表达(HLE-B3组0.79±0.07、HLE-B3+H2O2组0.31±0.03)(P<0.05),而明显促进KLF6的表达;miR-124-3p过表达或抑制KLF6表达可促进HLE-B3细胞增殖,抑制HLE-B3细胞凋亡(19.34±1.27、7.66±0.38;19.29±1.33、11.46±1.02),促进Cyclin D1(0.39±0.04、0.89±0.08;0.39±0.04、0.74±0.07)、Bcl-2表达(0.29±0.03、0.74±0.07;0.29±0.03、0.60±0.06),抑制P21(0.73±0.07、0.26±0.03;0.79±0.07、0.33±0.03)、Bax表达(0.86±0.08、0.37±0.03;0.86±0.08、0.51±0.05)。共转染miR-124-3p mimics与WT-KLF6可明显降低HLE-B3细胞的荧光素酶活性(0.27±0.03、0.98±0.08)(P<0.05);过表达KLF6可逆转miR-124-3p对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞增殖及凋亡的作用。结论 miR-124-3p可通过靶向调控KLF6表达进而促进H2O2诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞增殖并抑制其凋亡。

• 单位
  海南医学院第二附属医院