三七总皂甙调控内皮Vps34自噬通路减轻慢性间歇性缺氧诱导的内皮-血小板黏附机制研究

作者：王铭铭; 王彦辉; 张红丽; 史大卓; 李平^*

来源：中国中西医结合杂志, 2023, 43(06): 688-695.

• 三七总皂苷
• 慢性间歇性缺氧
• 血小板
• 内皮细胞
• 自噬
• 中药

目的 通过内皮Vps34自噬通路，探讨三七总皂苷（PNS）抑制慢性间歇性缺氧（CIH）诱导内皮-血小板黏附的作用机制。方法 采用随机数字表法将90只大鼠分为对照组（n=10）、CIH组（n=20）、阿司匹林组（n=20）、PNS低剂量组（n=20）及PNS高剂量组（n=20）。除对照组外，通过控制动物饲养箱中氧气浓度，建立CIH大鼠模型。造模成功率为51%,CIH组10只，阿司匹林组10只，PNS低剂量组12只，PNS高剂量组9只。阿司匹林组给予阿司匹林肠溶片12 mg/（kg·d）,PNS低、高剂量组分别灌胃给予血塞通软胶囊80、160 mg/（kg·d），对照组和CIH组给予等量生理盐水，均持续3周。采用流式细胞术（FCM）检测大鼠主动脉内皮细胞（AEC）凋亡率，FCM及免疫荧光法检测大鼠AEC表面血管血友病因子（VWF）表达，Western Blot法检测AEC中Vps34自噬通路相关蛋白表达水平。细胞研究采取正常大鼠AEC，分为无抑制剂对照组、CIH组、PNS组、SAR405（简称抑制剂）对照组、抑制剂CIH组及抑制剂PNS组。所有抑制剂组细胞采用SAR405预孵育1 h,PNS组细胞加入PNS标准品（160μg/m L）。除对照组外余组均建立间歇性低氧AEC模型。在AEC中加入正常大鼠血小板，诱导AEC-血小板黏附。采用FCM观察AEC凋亡率、VWF表达率及AEC-血小板黏附程度。结果 动物实验部分：与对照组比较，CIH组大鼠AEC凋亡率、VWF表达率及AEC中Beclin-1、Vps34、自噬相关蛋白（Atg）14及微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）表达均增加（P<0.05）。与CIH组比较，阿司匹林组、PNS高、低剂量组大鼠AEC凋亡率、VWF表达、Vps34、Atg14及LC3Ⅱ蛋白表达降低（P<0.05）。细胞研究部分：与空白对照组比较，CIH组AEC凋亡率、VWF表达率及血小板黏附均升高（P<0.05）；与CIH组比较，PNS组AEC凋亡率、VWF表达率及血小板黏附均降低（P<0.05）。用特异性抑制剂SAR405抑制Vps34自噬通路后，PNS减少AEC凋亡率、VWF表达及血小板黏附的作用消失，结论 PNS可减轻CIH诱导的内皮-血小板黏附，其作用机制与PNS抑制内皮细胞Vps34自噬通路有关。

• 单位
  北京中医药大学第三附属医院; 中国中医科学院