微小RNA-384靶向调控Smad核内相关蛋白1影响肺癌SPC-A1细胞侵袭迁移

作者：朱登彦; 余旸; 杨洋; 刘东雷; 吴恺; 齐宇; 赵松^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, (06).

• 肺癌
• 侵袭
• 微小RNA-384
• Smad核内相关蛋白1

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-384对肺癌SPC-A1细胞侵袭迁移的作用及靶向调控机制。方法 将miR-384模拟物(mimics)转染到SPC-A1细胞中,使用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法测定上调效果,噻唑蓝(MTT)法测定增殖变化,Transwell小室检测侵袭和迁移变化,蛋白质印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、波形蛋白(Vimentin)、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达。靶基因预测软件预测Smad核内相关蛋白1(SNIP1)可能为miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR-384 mimics及pcDNA 3.1-SNIP1共转染到SPC-A1细胞中,MTT、Transwell小室和Western blot检测pcDNA 3.1-SNIP1对上调miR-384抗肺癌细胞增殖和侵袭、迁移的影响。两组间比较采用t检验,多组差异比较采用单因素方差分析。结果 miR-384 mimics能够明显提高SPC-A1细胞中miR-384表达水平(0.97±0.13比2.28±0.27),降低细胞增殖(0.41±0.04比0.29±0.03)、侵袭(148.23±13.98比115.30±10.23)和迁移(196.48±17.36比137.58±12.07)能力,抑制细胞中MMP-2、Vimentin、MMP-9蛋白表达,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。荧光素酶报告载体鉴定结果显示miR-384靶向调控SNIP1表达。荧光素酶报告载体鉴定结果显示转染miR-384 Mimics后的SPC-A1细胞中SNIP1蛋白水平下降(t＝9.954,P<0.01),差异有统计学意义,pcDNA 3.1-SNIP1可明显逆转miR-384 mimics对SPC-A1细胞增殖[(0.26±0.04)个比(0.38±0.04)个]、迁移[(130.20±10.56)个比(158.25±11.47)个]和侵袭[(110.27±9.68)个比(149.20±10.38)个]的抑制作用,提高细胞中SNIP1和MMP-2、Vimentin、MMP-9蛋白表达水平,降低E-cadherin蛋白表达水平。结论 miR-384靶向调控SNIP1抑制肺癌SPC-A1细胞侵袭迁移。

• 单位
  郑州大学第一附属医院