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摘要
目的：基于网络药理学、分子对接和动物实验对参苓白术散缓解顺铂所致肾毒性（cisplatin nephrotoxicity, C-IN）的核心活性成分及潜在作用机制进行探讨。方法：运用中药系统药理学数据库与分析平台等数据库及文献检索初步获取参苓白术散组方中药的活性成分并预测其靶点；利用在线人类孟德尔遗传数据库、人类基因数据库、Drugbank数据库获取C-IN的靶点；取参苓白术散活性成分靶点与C-IN疾病相关靶点录入Venny 2.1.0软件，绘制韦恩图，得到两者的交集靶点。利用STRING数据库构建交集靶点的蛋白质相互作用（protein-protein interaction, PPI）网络并进行拓扑分析筛选核心靶点；运用DAVID数据分析平台进行基因本体（gene ontology, GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG）信号通路富集分析；选取关键靶点及核心活性成分，使用AutoDock软件进行分子对接。SPF级雄性C57BL/6J小鼠24只随机分为对照组、模型组、减毒组及参苓白术散组，每组6只，模型组和减毒组小鼠每3天腹腔注射1次顺铂注射液(3 mg·kg-1)诱导肾损伤，减毒组同时灌胃给予参苓白术散治疗(3 g·kg-1),参苓白术散组仅灌胃给予参苓白术散(3 g·kg-1),对照组每天给予等量的生理盐水。30天后处死小鼠，采用电感耦合等离子体质谱检测肾组织内铂离子含量；脲酶法测定血清尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）水平；肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐（creatinine, Cre）的水平；HE染色观察肾组织病理变化；PCR检测肾组织AKT1 mRNA、TP53 mRNA、PIK3R1 mRNA、MAPK1 mRNA、MAPK3 mRNA水平。结果：参苓白术散组方中药活性成分204个，相关靶点335个；C-IN疾病相关靶点1 298个，交集靶点137个。利用Cytoscape 3.8.2软件分析参苓白术散“有效成分-交集靶点”网络得到排名前3位的核心活性成分为槲皮素、山柰酚、木犀草素。PPI网络分析筛选出核心靶点分别为TP53、STAT3、AKT1、HSP90AA1等。GO富集分析得到794项生物学过程、84项细胞组分及152项分子功能。KEGG富集分析共得到188条通路，主要涉及癌症相关通路、脂质和动脉粥样硬化相关通路以及糖尿病并发症的AGE-RAGE通路、PI3K/AKT信号通路和MAPK信号通路。核心活性成分与关键作用靶点分子对接显示结合性良好，且核心活性成分均与MAPK1蛋白有最优结合活性。与模型组比较，减毒组肾组织内铂离子含量明显降低（P<0.01）,BUN水平显著降低（P<0.05）,肾小管评分显著降低（P<0.01）,肾组织损伤明显改善，PIK3R1 mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,TP53 mRNA、MAPK1 mRNA、MAPK3 mRNA表达水平显著降低（P<0.01）。结论：参苓白术散可能通过调节PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路缓解顺铂所致肾毒性。
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