杧果露水斑病菌和细菌性黑斑病菌双重PCR体系的建立

作者：房良; 蒲金基; 张贺; 李鸿鹏; 吴秋玉; 钟昌开; 刘晓妹^*

来源：分子植物育种, 2019, 17(02): 539-544.

DOI：10.13271/j.mpb.017.000539

• 杧果露水斑病菌
• 杧果细菌性黑斑病菌
• 双重PCR检测体系

杧果露水斑病和细菌性黑斑病在国内杧果产区普遍发生,严重威胁杧果安全生产,俗称杧果"两病"。建立准确高效的检测方法,提早检出杧果两病并及时采取防治措施,可有效减轻为害。本实验通过筛选反应体系和电泳条件,建立了可同时检测杧果中的露水斑病菌和细菌性黑斑病菌的双重PCR检测体系。结果表明:25μL反应体系,2×Taq PCR MasterMix 12.5μL,引物ML-SF9/SR5 (10μmol/L)各1.5μL、XcmHF/HR(10μmol/L)各1μL,模板各1μL,加ddH2O补足至25μL。反应条件为94℃预变性4 min;94℃变性45 s,65℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸5 min。电泳检测条件为1.5%琼脂糖凝胶浓度、120 V电压电泳25 min。该体系检测下限为杧果露水斑病原菌g DNA 0.224 ng/μL、细菌性黑斑菌液2.6×104cfu/m L。该技术可应用于田间杧果"两病"的早期检测与鉴定工作中。

• 单位
  海南大学; 农业部; 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所