应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒E2蛋白反式调节基因

作者：白桂芹成军刘妍杨倩黄艳萍蔺淑梅杨瑗张树林

来源：胃肠病学和肝病学杂志, 2005, (04): 327-330.

• 丙型肝炎病毒
• E2蛋白
• 抑制性消减杂交
• 新基因 Hepatitis C virus
• E2 protein
• Suppression subtractive hybridization
• Cloning

目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVE2蛋白反式调节相关基因。方法以HCVE2表达质粒pcDNA3.1(-)_E2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCVE...

• 单位
  解放军第302医院