结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体的构建、表达和鉴定

作者：曹元应; 房功思; 孟德娣; 汪学龙

来源：蚌埠医学院学报, 2014, 39(03): 288-294.

DOI：10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2014.03.006

• 结核分枝杆菌
• 重组抗原
• 真核表达载体

目的:建立结核分枝杆菌PPE68蛋白基因重组质粒的真核表达载体,为以后对PPE重组蛋白的免疫原性分析奠定基础。方法:提取结核分枝杆菌总DNA,PCR法扩增出PPE68编码基因,通过线性T克隆载体pGEM-T连接,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)后,转染至HeLa细胞中表达,Western blot鉴定表达产物。结果:PCR产物、pGEM-T-PPE68及pcDNA3.1(+)-PPE68分别经双酶切后均获得同一大小基因片段,表达产物经Western blot鉴定相对分子质量约为40 000。结论:成功构建了结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体,并获得了表达产物。

• 单位
  安徽医学高等专科学校; 安徽医科大学