MIIP真核表达载体的构建及其稳定过表达MDA-MB-231细胞系的建立

作者：徐荣荣; 裴秀英; 吕叶; 马锐; 苏芹; 金彦国; 陈捷珲; 高玉婧

来源：宁夏医科大学学报, 2016, 38(04): 376-380.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2016.04.006

• MIIP基因
• 真核表达载体
• MDA-MB-231
• 细胞转染

目的构建pCDNA3.0-MIIP真核表达载体并建立其稳定转染的MDA-MB-231细胞系。方法pGEX-4T-1-MIIP重组质粒及pCDNA3.0真核表达载体分别经Xho I和EcoR I双酶切后,回收目的基因,T4 DNA连接酶连接后,转化得到pCDNA3.0-MIIP重组真核表达载体,对其进行双酶切和测序鉴定。脂质体法将鉴定后的pCDNA3.0-MIIP质粒转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别于转染后48和72h提取细胞总RNA,QRT-PCR法确定其转染。G418筛选转染细胞,Western blot检测目的蛋白表达。结果酶切及测序结果证实pc DNA3.0-MIIP真核表达载体构建成功。pcDNA3.0-MIIP转染至MDA-MB-231细胞后,QRT-PCR检测证实MIIP表达显著增强。G418筛选后得到单克隆细胞群,Western blot检测证实MIIP表达显著增强。结论成功构建出了可在真核细胞中高效表达MIIP基因的pc DNA3.0-MIIP重组质粒;建立了稳定过表达MIIP的MDA-MB-231细胞系。

• 单位
  基础医学院; 宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学