过表达及干扰人APE1重组腺病毒载体的构建与鉴定

作者：郭润民; 吴子君; 黄瑞娜; 王志强; 姜佳美; 刘畅; 梁国标; 陈科辉; 李腾; 李上海; 莫海亮; 闫海; 何松坚; 游琼; 吴铿

来源：广东医学院学报, 2016, 34(05): 463-466.

• 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1
• RNA干扰
• AC16心肌细胞

目的构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒。方法应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定。用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒p BHGdelta E1lox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达。结果基因测序显示APE1过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293A细胞包装成功。APE1过表达和shRNA腺病毒明显影响人AC16心肌细胞中APE1蛋白表达水平。结论成功构建了人APE1过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体。

• 单位
  广东医科大学附属医院; 广东医科大学