含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测

作者：陈云; 姚堃; 孙华; 彭光勇; 丁传林; 谢芳艺; 周峰

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2004, (03): 297-300.

DOI：10.3969/j.issn.1007-4368.2004.03.031

• EB病毒
• LMP2A基因
• 毕氏酵母
• 表达

目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A。pICZαA-LMP2A经Sac I酶切线性化,采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株,用PCR鉴定阳性酵母转化子,并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳和western-blotting分析。结果:重组质粒pPICZαA-LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS-PAGE电泳和western-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54 Kda,与预计值相同。结论:构建了LMP2A毕氏酵母表达载体,并在酵母细胞中成功表达。

• 单位
  南京医科大学