pE_6/p53/GFP重组真核表达载体的构建及其对肺腺癌细胞周期的影响

作者：毛丽伟; 王卫东; 李德志; 陈正堂

来源：第三军医大学学报, 2007, (24): 2323-2326.

• 放射敏感性增强子
• RT-PCR
• Western blot radiation-inducible promoter
• RT-PCR
• Western blot

目的构建放射诱导启动子序列所调控的wt-p53抑癌基因的真核表达载体pE6-p53/GFP,并研究其功能。方法全基因合成方法获得放射敏感性增强子E6;PCR法从pcDNA3.1(+)/p53质粒中扩增p53cDNA全长序列;双酶切IRES2-EGFP双顺反子表达载体,获得IRES2-EGFP报告基因片段,以pCI-neo为载体构建重组pE6/p53/GFP。重组体经双酶切、测序鉴定其正确性。采用脂质体法将重组质粒转染H1299(p53-/-)细胞,G418筛选出稳定表达细胞株。RT-PCR分析基因整合;Western blot方法分析不同放射剂量后P53蛋白表达情况及持续时间;流式细胞技术分析...

• 单位
  新桥医院