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摘要
目的拟原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的Passenger结构域并制备多克隆抗血清,初步分析其保守性及亚细胞定位。方法 PCR扩增Passenger结构域编码基因并克隆入pCold TF原核表达质粒中,重组质粒转化大肠杆菌E.coil DH5α,通过PCR和测序鉴定后,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌中诱导表达目的蛋白,纯化目的蛋白后免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体。Western blot分析NGO2105蛋白在临床分离菌株中的保守性。采用流式细胞技术分析淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白Passenger结构域细胞定位。结果成功表达出可溶形式的NGO2105蛋白Passenger结构域,重组蛋白免疫小鼠后可获得效价达到5.12×105的多克隆抗血清,Western blot分析显示Passenger抗血清能与不同临床分离菌株中的NGO2105蛋白特异性反应,流式细胞技术分析显示Passenger结构域定位于淋病奈瑟菌菌体表面。结论成功获得可溶形式表达的Passenger蛋白及其多克隆抗体,NGO2105蛋白在临床分离的淋病奈瑟菌中有较好的保守性。亚细胞定位分析提示NGO2105蛋白为一种膜蛋白,其Passenger结构域定位于菌体表面,本研究可为进一步研究淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的结构与功能奠定实验基础。
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