E49F对麦氏交替单胞菌木聚糖酶XynZT-2的活性分析

作者：石嘉宁; 吴俊涛; 崔彩霞; 李同彪^*; 周晨妍^*

来源：食品与发酵工业, 2023, 49(20): 221-227.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.034509

• 麦氏交替单胞菌
• 木聚糖酶
• 定点突变
• 酶学性质
• 分子对接

为了探究酶表面氨基酸残基对催化性能的影响，对麦氏交替单胞菌(Alteromonas macleodii)的木聚糖酶XynZT-2进行分子改造。基于计算机模拟，预测了潜在的有益突变体E49F,通过定点突变构建突变酶基因xynZT-2E49F,并将原酶与突变酶基因转化大肠杆菌BL21(DE3)异源表达。酶学性质分析发现，突变酶XynEF最适温度为70℃,相比原酶XynZT-2提高了25℃,酶活力提高了6.4倍。酶动力学分析发现，突变酶的kcat/Km值相比原酶提高了10.1倍，突变酶的Km值明显下降，对底物的亲和力增强。通过酶与底物分子对接，揭示了底物在突变酶催化活性口袋内的结合构象以及酶活力提高的潜在原因。为GH43家族木聚糖酶的分子改造研究提供了基础。

• 单位
  新乡医学院; 生命科学技术学院; 黄淮学院