单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

作者：谢堃; 乔军; 孟庆玲; 彭叶龙; 赵海龙; 马玉; 陈诚; 才学鹏; 陈创夫

来源：畜牧兽医学报, 2015, 46(06): 998-1003.

• rli87基因
• LM感受态细胞
• 缺失株
• 生长特性
• 同源重组

拟构建单核细胞增生李斯特菌(LM)非编码RNArli87基因缺失株,对其进行分子鉴定,分析rli87基因缺失对LM生长的影响。用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体,并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体,将其转化入LM-SB5感受态细胞,利用温度(42℃)和氯霉素(10μg·mL-1)的抗性双重压力来实现同源重组,筛选同源重组菌进行分子鉴定,测定缺失株与母源野毒株37℃条件下生长曲线。结果显示:PCR和测序结果证实成功获得了LM-Δrli87重组菌。通过25代的连续传代,PCR鉴定结果显示,该缺失株具有良好的遗传稳定性。与野毒株进行对比,在37℃条件下缺失株与野毒株的生长差异不显著(P>0.05)。非编码RNArli87基因在37℃条件下对LM生长没有明显的调控作用。

• 单位
  石河子大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 动物科技学院; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室