Thr592磷酸化修饰对SAMHD1抗胃癌的影响及其机制

作者：袁未未; 陈章明; 孟磊; 应松成; 徐阿曼^*

来源：安徽医科大学学报, 2023, 58(04): 615-621.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.04.016

• SAMHD1
• 磷酸化修饰
• Thr 592
• 胃癌
• 细胞增殖

目的 阐明苏氨酸592(Thr592)位点磷酸化修饰对不育α基序和含HD结构域蛋白1(SAMHD1)抑制胃癌增殖的影响以及潜在的作用机制。方法 分析数据库中胃癌组织和细胞系中SAMHD1蛋白的翻译后修饰(PTMs),免疫组织化学染色检测胃癌患者配对组织中SAMHD1 Thr592磷酸化情况。在胃癌细胞中，构建并瞬时转染SAMHD1 Thr592变异体，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖。加用不同浓度细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)6抑制剂帕博西尼(Palbociclib),抑制下游CDK2蛋白苏氨酸160(Thr160)位点的磷酸化，降低SAMHD1蛋白Thr592磷酸化水平。利用3个在线数据库分析SAMHD1的互作蛋白并取交集得出Nik相关激酶(NRK)蛋白。采用免疫共沉淀(Co-IP)、质谱分析和Western blot验证SAMHD1与NRK蛋白互作，并检测NRK对SAMHD1 Thr592位点磷酸化的影响。结果 与类泛素化等PTMs比较，肿瘤中SAMHD1的磷酸化修饰水平最高，差异有统计学意义(P<0.01),免疫组化实验显示，磷酸化SAMHD1(Thr592)在胃腺癌中表达高于癌旁正常黏膜组织，差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示在MKN-45细胞中过表达野生型和突变体组细胞内的SAMHD1蛋白表达升高，野生型、T592E和HD/AA组中磷酸化SAMHD1水平也升高，CCK-8实验表明，SAMHD1野生型和T592A均能抑制胃癌细胞增殖，而T592E和HD/AA对胃癌增殖无影响。在过表达SAMHD1基础上，加入不同浓度Palbociclib处理后，CCK-8提示细胞增殖受到抑制，且Western blot检测提示磷酸化水平也降低。通过Co-IP和质谱鉴定来筛选SAMHD1的互作蛋白谱和数据库交集取得NRK蛋白，Co-IP和Western blot实验结果提示NRK与SAMHD1蛋白互作，促进SAMHD1 Thr592位点发生磷酸化。结论 Thr592位点磷酸化修饰可能会促使SAMHD1失去抑制胃癌细胞增殖的能力，但是这一过程可被Palbociclib逆转；NRK与SAMHD1蛋白互作，促进SAMHD1 Thr592位点发生磷酸化。

• 单位
  安徽医科大学; 基础医学院; 安徽医科大学第一附属医院