同型半胱氨酸通过激活beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)促进人肝细胞自噬

作者：马芳; 张辉; 沈江涌; 马胜超; 万瑀; 贺茜; 焦运; 王强; 姜怡邓^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2022, 38(09): 813-818.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009465

• 同型半胱氨酸(Hcy)
• 自噬
• beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)

目的 探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法 体外培养肝细胞，分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、 LC3BⅠ)的表达水平；使用(0、 25、 50、 100)μmol/L氯喹(CQ)处理肝细胞，CCK-8法检测CQ对肝细胞增殖的抑制作用，Western blot法检测LC3B和AMBRA1的表达；采用AMBRA1小干扰RNA感染肝细胞后，实时荧光定量PCR和Western blot法检测肝细胞AMBRA1表达干扰效率。敲低AMBRA1后肝细胞用Hcy处理，Western blot法检测LC3B蛋白表达水平，转染表达双荧光蛋白和LC3的腺病毒(mRFP-GFP-LC3),激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬流的变化。结果 与对照组相比较，Hcy处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值升高；50μmol/L CQ对肝细胞增殖的抑制率接近于50%;与对照组相比，Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、 AMBRA1的表达明显升高，而Hcy联合CQ组的LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、 AMBRA1的表达比Hcy组明显降低；敲低AMBRA1后，肝细胞LC3BⅡ/LC3BⅠ比值下降；与对照组相比，Hcy组自噬体和自噬溶酶体增加，敲低AMBRA1后，自噬体和自噬溶酶体减少。结论 Hcy可通过激活AMBRA1促进肝细胞自噬。

• 单位
  基础医学院; 宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院